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逆流色谱装置的工作步骤:二

2015-12-23 9:05:23点击:


  样品溶液的制备和进样  


  在逆流色谱样品溶液的制备中,通常是用上、下相的混合溶液来溶解样品。当样品量比较时,上下相任意一相来溶解;当样品量比较多时,通常要用适量等体积的上、下相混合溶液来溶解。样品溶液浓度过高,形成“样品栓”的机率较大,此时在分离柱中会把整个固定相推出分离柱。若出现此种情况,只能通过稀释样品的办法来解决。进样量体积太大,会使峰带变宽,固定相会出现流失。此时,可采用降低流速的办法来改善这一缺陷。 



  分离和检测 


  进样后,则进入高速逆流色谱分离的过程,利用在线检测器监测得到逆流色谱峰形图,利用馏分收集器或手动收集法收集被分离后的相应于各色谱峰的馏分。常用的在线检测方法有蒸发光散射检测器、质谱分析仪和红外光谱等。在高速逆流色谱操作中洗脱方式除了正常洗脱外,还有梯度洗脱方式等。但不论何种洗脱方法,在分离实践中,采用从头到尾的洗脱方式得到的分离效果较好。因为对于某些溶剂系统来说,从尾到头的洗脱方式会导致一定量的固定相流失,从而降低峰形分辨度。流失的固定相水滴会被吸附在检测器的流通池壁上,对溶质吸收峰形成“噪音”干扰。

 


  清洗分离柱 


  高速逆流色谱分离完成后,应利用氮气瓶或者空气压缩机将分离柱中的液体吹出,并收集这些排出液体,并测定固定相的保留率[R=(V总-V下测)/V总]。需要注意的事,吹出的固定相中可能会含有有用成分,这些成分在固定相中分配系数较大。随后分离柱要用乙醇清洗一次,对于采用了酸碱或缓冲盐溶液首先用蒸馏水冲洗,之后再用乙醇冲洗,以避免残留物对下次分离工作的干扰和影响。



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